纳豆激酶是一种良好的天然蛋白酶类溶栓物质。 国内外许多学者对该酶进行了基因工程研究,但在克隆表达过程中出现了许多长短不同的基因片段。 本研究通过原产日本的优质纳豆中分离鉴定出高产纳豆杆菌 N07 并提取该菌株的全基因组;通过 PCR 手段扩增出能编码纳豆激酶信号肽,前导肽和成熟肽的前纳豆激酶酶原基因 NK1,以及能编码纳豆激酶成熟肽的纳豆激酶基因 NK2,构建了纳豆激酶基因的表达载体 pET30a-NK1 和 pET30a-NK2,转化E. coli BL21 后在大肠杆菌中表达,并进行了活性分析。 结果发现,纳豆激酶酶原基因片段 NK1 能成功表达出有活性的分泌型纳豆激酶;而纳豆激酶基因片段 NK2 的表达产物为无活性的包涵体。 在对 NK1 和 NK2 的比较研究后可知,纳豆激酶酶原基因片段 NK1 能在大肠杆菌中很好的分泌表达,这将为纳豆激酶基因工程的深入研究奠定基础。