【目的】比较蔗糖和Percoll两种不同介质的密度梯度离心分离纯化虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei，EHP)孢子的效果及对EHP孢子发芽活力的影响。【方法】取感染EHP的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肝胰腺充分研磨，经3次差速离心后，设置介质质量分数为30%，60%，90%的梯度，分别进行蔗糖和Percoll密度梯度离心，比较两种介质不同分层中EHP孢子的数量和纯化效果。纯化样品分别用0.1 mol·L-1的KOH溶液、0.15 mol·L-1的HCl溶液、0.15 mol·L-1的NaOH溶液、0.025 mol·L-1 pH为11.5的磷酸盐缓冲液、0.05 mol·L-1 pH为8.8的TrisHCl溶液、0.01 mol·L-1 pH为4.8的柠檬酸盐缓冲液等6种溶液于28 ℃孵育30 min，比较EHP孢子的发芽率。【结果】蔗糖密度梯度离心后EHP孢子主要分布在蔗糖质量分数为90%层的底层，数量为1.53×10 8个。Percoll密度梯度离心后EHP孢子主要分布在Percoll质量分数为90%层的下层，数量为2.64×10 7个。经Percoll或蔗糖密度梯度离心分离纯化的EHP孢子再经上述6种不同溶液处理后，孢子发芽率存在差异；经0.1 mol·L-1的KOH溶液或0.05 mol·L-1 pH为8.8的TrisHCl溶液诱导时，两种介质分离纯化所得的EHP孢子发芽率之间差异具有统计学意义(p<0.05)。【结论】以介质质量分数为30%，60%，90%的梯度对EHP孢子进行密度梯度离心，蔗糖的分离纯化效果比Percoll更好，对EHP孢子的发芽率影响更小；经蔗糖或Percoll分离纯化的EHP孢子再经0.05 mol·L-1 pH为8.8的Tris-HCl溶液或0.025 mol·L-1 pH为11.5 的磷酸盐缓冲液处理，可获得较高的发芽率。